Berapakah kos untuk mengubah ligation?
Berapakah kos untuk mengubah ligation?

Video: Berapakah kos untuk mengubah ligation?

Video: Berapakah kos untuk mengubah ligation?
Video: Nak pilih braces yang mana 2024, November
Anonim

Transformasi . Tambah antara 1-5 µl daripada pengikatan campuran kepada sel yang kompeten untuk transformasi . Dipanjangkan pengikatan dengan PEG menyebabkan kejatuhan transformasi kecekapan (Cepat Ligation Kit). Elektroporasi disyorkan untuk binaan besar (>10, 000 bp).

Di sini, berapa banyak produk ligation yang saya perlukan untuk transformasi?

Transformasi . Tambah antara 1-5 µl daripada pengikatan campuran kepada sel yang kompeten untuk transformasi . Dipanjangkan pengikatan dengan PEG menyebabkan kejatuhan transformasi kecekapan (Cepat Ligation Kit). Elektroporasi disyorkan untuk binaan besar (>10, 000 bp).

Seterusnya, persoalannya ialah, apakah Ligasi dan transformasi? Dalam eksperimen pengklonan biasa, penyelidik mula-mula memasukkan sekeping DNA, seperti gen, ke dalam sekeping DNA bulat yang dipanggil plasmid. Langkah ini menggunakan enzim sekatan dan ligase DNA dan dipanggil a pengikatan . Selepas a pengikatan , langkah seterusnya ialah memindahkan DNA ke dalam bakteria dalam proses yang dipanggil transformasi.

Selepas itu, seseorang juga mungkin bertanya, berapa banyak DNA yang diperlukan untuk pengikatan?

Kepekatan keseluruhan vektor + sisipan hendaklah antara 1-10 Μg/ml untuk cekap pengikatan . Vektor:Sisipkan nisbah molar antara 1:1 dan 1:10 disyorkan (1:3 adalah tipikal). Jika anda tidak pasti dengan anda DNA kepekatan, melakukan pengikatan berbilang dengan nisbah yang berbeza-beza.

Berapa lama anda boleh menyimpan tindak balas ligation?

Ligasi boleh dilakukan pada suhu bilik atau lebih sejuk (fikir 12-16°C) semalaman atau bahkan selama beberapa hari, jika awak sangat sibuk. Awak boleh juga simpan ligation di dalam peti sejuk dan keluarkan kemudian untuk terus mengikat pada suhu bilik selama panjang sebagai keperluan.

Disyorkan: